[유전학] 세균(콜로니)과 바이러스(플라크)의 관찰 + RFLP, 블로팅

세균과 바이러스

세균과 바이러스는 체세포분열만 수행하며, 기하급수적으로 성장한다는 특성이 있습니다.

이러한 집합체를 세균은 콜로니, 바이러스는 플라크라고 부릅니다.

같은 콜로니 또는 플라크 내의 유전자는 동일하지만 다른 집단과는 유전자가 다릅니다.

 

 

배지

최소 배지는 포도당과 무기염류(NaCl), 비오틴의 최소 영양분만 포함되어 있습니다.

LB(완전) 배지는 Agar와 트립톤(질소와 탄소의 공급원으로 작용), 이스트(세균의 영양분), 그리고 무기염류(NaCl) 등 모든 세균이 자랄 수 있는 영양분으로 이루어져 있습니다.

+ 보충 배지는 이전에도 다루었듯 특정 아미노산만 없애서 세균의 유전자형을 확인하기 위한 배지입니다.

 

 

관찰 (측정)

도말 평판법, 획선 평판법은 콜로니 또는 플라크를 평평히 만들어 양을 관찰하는 것입니다. 

주입 평판법은 콜로니 또는 플라크를 희석시킨 뒤 페트리 접시에 주입하여 관찰하는 것입니다.

연속 희석법은 10^n배로 연속적으로 희석(최소 10^-5)시켜 관찰하는 것입니다.

분광 광도 측정법은 용액 내 세균/콜로니가 많을수록 산란이 많이 일어나므로 시험관 뒤의 계측도가 낮아진다는 특성을 이용하는 것입니다.

혈구(세균) 계수기는 1mm x 1mm x 0.1mm에 있는 콜로니를 세어서 통계를 내는 방법으로 세균의 양을 측정합니다.

 

 

세균과 바이러스의 생장 곡선

세균은 시간에 따라 log scale보다 빨리 증가(아래로 볼록)하며, 바이러스는 계단식으로 증가합니다.

 

세균 생장곡선은 회분 배양(O2와 영양분이 부족한 상태)에서의 시간에 따른 세균의 수를 말합니다.

** 계대 배양은 반대로 배지를 계속 교체해주는 배양법으로, 유도기가 길어지며 속도가 꺾입니다.

 

바이러스는 계단식의 증가 추세를 보이며 암흑기, 성장기, 방출기(분열속도 = 방출속도)를 거칩니다.

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유전자 찾는 법 (실험)

유전병의 상염색체/성염색체 유전 여부나 우성/열성 여부를 찾기 위해 유전자를 탐색하는 방법에는 다음과 같은 방법들이 있습니다.

 

RFLP는 DNA를 유전자 제한효소로 잘랐을 때 사람마다 길이가 다르게 발생하는 현상을 이용하여 전기영동 시키는 것입니다.

서던 블로팅은 특정한 염기서열을 가진 DNA 절편을 전기영동을 통해 찾아내는 방법입니다.

(+ 노던 블로팅은 RNA, 웨스턴 블로팅은 단백질을 이용)

= 위의 두 방법 모두 DNA 절편 전기영동을 통해 유전자를 찾아내는 방법으로 이해하면 됩니다.

 

점 블로팅(ASO)은 전기영동 없이 짧은 길이의 특수 형광 표지된 (뉴클레오티드) 탐침을 DNA에 뿌려,

혼성화 될 경우 씻겨지지 않아 해당 DNA임을 확인할 수 있습니다.

(ex : 색이 진하면 AA, 색이 연하면 Aa, 색이 나타나지 않으면 aa 등으로 확인 가능)

(ex : 또는 A, a에 대해 따로 실험하여 찾을 수도 있음)